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離子色譜儀:離子色譜柱如何清洗及維護(hù)原則

發(fā)布日期:2022-05-06 15:15

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  在離子色譜柱分離檢測(cè)過(guò)程中,分析物和基質(zhì)污染能使固定相受到影響,我們?cè)谑褂眠^(guò)程中應(yīng)當(dāng)注意固定相表面特殊性質(zhì)可能與分析物相互作用而使反相色譜柱受到污染產(chǎn)生反壓?jiǎn)栴},今天我們就來(lái)分析一下,導(dǎo)致IC離子色譜柱污染的因素有哪些?

  在色譜柱上有很多填料,包括聚合物,聚合物表面涂上硅膠和氧化鋁,無(wú)機(jī)-有機(jī)混合物,涂層氧化鋯和石墨化碳都存在于這些鍵合硅膠上;為增加色譜柱的應(yīng)用,常利用各種流動(dòng)相和添加物作用于色譜柱,添加物可以改變或修飾填料的表面,有時(shí)候還有可能會(huì)污染鍵合相表面;硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇,殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中,這些硅烷醇具有弱酸性,因此能與某些待分析物反應(yīng)成為基質(zhì)成分。

  樣品中含有的鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些物質(zhì)是一些可能在使用時(shí)與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。有些物質(zhì)有比待測(cè)物或少或大的保留值,那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類一般來(lái)說(shuō)在空體積時(shí)就被沖出色譜柱,這些非目標(biāo)產(chǎn)物的干擾能被檢測(cè)器檢測(cè)到而且能形成色譜峰,氣泡,基線上移或者是負(fù)峰。如果樣品成分在柱子中有很強(qiáng)的保留而且流動(dòng)相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來(lái),多次上樣后,這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會(huì)積累在柱頭。這些行為通常只有通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)才能發(fā)現(xiàn)。有著中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現(xiàn)為寬峰,基線擾動(dòng),或者基線漂移。

  我們?cè)趯?duì)離子色譜柱進(jìn)行維護(hù)時(shí),要遵循這幾個(gè)原則:確保離子色譜不干燥,不長(zhǎng)霉,不進(jìn)顆粒物;不進(jìn)入入可逆吸附物,特別是有機(jī)污染物,在一定的流速和壓力條件下運(yùn)行。

  在清洗離子色譜柱時(shí),要遵循這幾個(gè)原則原則:用高濃度的淋洗液清洗強(qiáng)保留的污染物;用有機(jī)酸如草酸、酒石酸,檸檬酸等清洗金屬污染物;用有機(jī)溶劑兼容的大濃度清洗有機(jī)污染物;清洗之后,必須用二次去離子水平衡。雖然對(duì)有機(jī)溶劑兼容的離子色譜柱,受污染后都可以用清洗后再生,但并不是所有的污染物都能夠通過(guò)清洗去除的,正確使用離子色譜柱和采用合適的樣品預(yù)處理手段是延長(zhǎng)離子色譜柱壽命的好方法。

  離子色譜柱污染了怎么辦?如何清洗?

  離子色譜柱的再生一般的情況下效果不是很好.應(yīng)該根據(jù)情況確定再生方法;一般鍵合硅石基質(zhì)的離子色譜柱可100%兼容有機(jī)溶劑,高聚物基質(zhì)的離子色譜柱交連度大于50%的也可100%兼容有機(jī)溶劑,可用純的有機(jī)溶劑來(lái)沖洗柱子以消除有機(jī)物的污染,但是應(yīng)注意一點(diǎn)有機(jī)溶劑沖洗以前先用甲醇/水混合物沖洗,再用100%甲醇沖洗,后用有機(jī)溶劑沖洗,再用100%甲醇沖洗,再用甲醇/水混合物沖洗,再用水沖洗,千萬(wàn)不可直接用純有機(jī)溶劑沖洗,過(guò)后也千萬(wàn)不可直接用水沖洗,對(duì)于交連度小于50%的高聚物色譜柱,因?qū)τ袡C(jī)溶劑的兼容性差,有機(jī)物沖洗對(duì)柱效都有損壞。如果柱子是由于蛋白質(zhì)、多環(huán)芳烴以及柱內(nèi)滋生菌類或藻類或樹脂發(fā)生分解這幾種情況解決的方法只能是更換色譜柱。


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